研究基于182个基因组重测序的水稻品种,通过分蘖表型与根际微生物组数据的关联分析,揭示了根际微生物组与水稻分蘖数之间的密切联系(图1)。根际微生物组对分蘖数变异具有显著的解释力(28.2%),且根际微生物组与基因型的互作效应占基因型总解释量的79.9%。通过微生物群落特征与分蘖表型的线性回归分析,发现根际微生物的α多样性(shannon index)和β多样性(PCo1)均与水稻分蘖数存在显著关联。值得注意的是,在两个独立试验田环境下,鉴定出12个与分蘖数显著相关的细菌菌属,其中包括7个正相关菌属和5个负相关菌属。
图1 群体水平根际微生物组与水稻分蘖相关性分析
利用水稻根际细菌资源库,选取分蘖相关属的菌株在实验室和田间环境下开展功能验证。结果显示,Roseateles R780和Piscinibacter R1801均显著促进水稻分蘖,而Exiguobacterium R2567、 Burkholderia R2488和Pleomorphomonas R1405则显著抑制水稻分蘖(图2)。
图2 根际微生物调控水稻分蘖
为了验证调控分蘖的功能是否依赖于植物激素独脚金内酯(SL)通路,团队检测了功能菌处理下SL的合成及信号转导状态,同时在SL合成突变体(d27)及信号突变体(d14)中进行表型验证。发现Roseateles R780和Exiguobacterium R2567对分蘖的调控依赖于水稻SL途径,但以不同方式发挥功能:Roseateles R780的促进作用依赖于SL的合成及信号转导,而Exiguobacterium R2567的抑制作用更依赖于SL信号转导(图3)。
图3 根际微生物通过水稻 SL遗传通路调控分蘖
为了探索Exiguobacterium R2567抑制分蘖的分子机制,团队测试并明确了Exiguobacterium R2567调控分蘖活性源于菌代谢物,并成功分离出关键活性分子S6,经LC-MS及NMR鉴定其为环二肽cyclo(Leu-Pro)。实验表明,cyclo(Leu-Pro)可重现Exiguobacterium R2567功能,即促进OsD53蛋白降解,并在实验室和大田环境下显著抑制水稻分蘖的产生(图4)。
图4 Exiguobacterium R2567分泌cyclo(Leu-Pro)抑制水稻分蘖
为了探究cyclo(Leu-Pro)的作用机制,解析了OsD14-cylco(Leu-Pro)复合物的高分辨率晶体结构,并结合通过MST、BLI、YLG等分子互作实验,揭示了cyclo(Leu-Pro)与OsD14的作用细节,及其与SL功能类似物rac-GR24在结合方式方面高度相似性。遗传证据表明,在突变体d14上cyclo(Leu-Pro)丧失调控OsD53蛋白含量和水稻分蘖的作用。综上说明,cyclo(Leu-Pro)可以模拟独脚金内酯(SL)功能,直接结合SL受体OsD14并激活SL信号,抑制水稻分蘖的形成(图5)。
图5 Cyclo(Leu-Pro)直接结合OsD14激活SL信号抑制水稻分蘖